Abstrait

Congrès Biotechnologie 2015 : Nanosystèmes formés de complexes amphiphiles d'antimoine(v) incorporant de l'amphotéricine B pour le traitement de la leishmaniose - Arshad Islam - Universidade Federal de Minas Gerais

Arshad Islam, Juliane S Lanza, Flaviana R Fernandes, Delia CM Santos, Lucas AM Ferreira, Cynthia Demicheli, Maria N Melo et Frédéric Frézard

Ce travail visait à développer une formulation orale d'amphotéricine B (AmB) pour le traitement de la leishmaniose. L'AmB est un polyène macrolide antifongique et antibactérien dérivé de la souche Streptomyces nodosus, qui appartient au groupe des médicaments anti-leishmaniens de deuxième génération et est largement utilisé en cas d'échec du traitement par des composés antimoniaux. L'AmB a été incorporée dans des nanosystèmes formés de complexes amphiphiles d'antimoine (V) avec des ligands de la série alkylméthylglucamide (L8 et L10, avec respectivement 8 et 10 chaînes carbonées). Le taux d'incorporation de 0,2 % d'AmB dans les dispersions SbL8 et SbL10 a été déterminé à l'aide d'une technique basée sur la HPLC et s'est avéré être respectivement de 84 ± 1 % et 74 ± 1 %. La caractérisation de SbL10-AmB et SbL8-AmB par dichroïsme circulaire et spectroscopies UV-visible a montré que l'AmB est présente principalement sous la forme monomérique dans les nanosystèmes SbL8 et Sb10, qui est la forme la moins toxique pour l'hôte et potentiellement la plus biodisponible. Le potentiel de traitement oral de la leishmaniose viscérale (VL) et cutanée (CL) a été évalué dans des modèles murins en comparaison avec le médicament standard Anforicin B® ou Glucantime® administré par voie intrapéritonéale ou orale. Français Chez les souris Balb/c infectées par Leishmania amazonensis, la formulation mixte SbL10-AmB (170 mg Sb/kg et 14 mg AmB/kg, tous les 2 jours par voie orale) a entraîné une diminution significative de la taille des lésions, par rapport au Glucantime® et au SbL10 administrés par voie orale (170 mg Sb/kg, tous les 2 jours), à l'Anforicine B® (> 1 mg/kg/tous les 5 jours, par voie intrapéritonéale) et au groupe témoin salé. Chez les souris Balb/c infectées par Leishmania infantum, les formulations mixtes SbL10-AmB et SbL8-AmB administrées par voie orale (170 mg Sb/kg et 14 mg AmB/kg par jour) ont réduit significativement la charge parasitaire dans le foie par rapport au témoin non traité, à un niveau similaire à celui de l'AmB administré par voie intrapéritonéale (0,9 mg/kg/jour). Cette étude a établi pour la première fois le potentiel des formulations mixtes SbL10-AmB et SbL8-AmB pour le traitement oral de la leishmaniose cutanée et viscérale, indiquant leur potentiel de développement et d'applications ultérieurs. L'ARN interférent (ARNi) a été créé comme une stratégie incroyable dans l'étude de la génomique utile ainsi que du contrôle des maladies des plantes. Dans ce rapport, des ARN doublement isolés (dsRNA) ciblant la protéine 3-hydroxy-3-méthylglutaryl coenzyme A réductase (HMGR), qui catalyse une réponse enzymatique limitant la vitesse dans la voie du mévalonate de la synthèse de l'hormone adolescente (JH) dans le ver de la capsule du coton, ont été transmis dans les plants de coton au moyen d'une mutation intercédée par Agrobacterium tumefaciens. La PCR et l'analyse Sothern ont révélé l'intégration de la protéine HMGR dans le génome du coton. La RT-PCR et la qRT-PCR ont confirmé le niveau élevé d'interprétation de la dsHMGR dans les lignées de coton transgéniques.L'expression de HMGR, tant dans l'expression que dans le niveau d'expression, a été complètement régulée à la baisse chez les nouveau-nés de vers de la capsule du coton (Helicoverpa armigera) après avoir bénéficié des feuilles de plantes transgéniques HMGR. Le niveau d'expression de la qualité HMGR chez les nouveau-nés élevés sur des feuilles de coton transgéniques était jusqu'à 80,68 % inférieur à celui de la forme sauvage. De plus, le niveau d'expression relatif de la qualité de la vitellogénine (Vg, source vitale de nourriture pour le développement des organismes naissants de la postérité) a également été réduit de 76,86 % lorsque les nouveau-nés de vers ont été traités avec des feuilles transgéniques. Les résultats des bio-essais sur les insectes ont montré que la plante transgénique hébergeant dsHMGR limitait le gain de poids net et retardait le développement des nouveau-nés de vers de la capsule du coton. Pris ensemble, les dsARN communicants de cotonnier transgénique ont efficacement régulé à la baisse la qualité HMGR et ont entravé le développement et la résistance des insectes cibles, ce qui a donné plus de choix à la lutte contre les insectes des plantes. Mots clés : 3-hydroxy-3-méthylglutaryl coenzyme A réductase (HMGR), ver de la capsule du coton, impédance de l'ARN, coton transgénique, ARN doublement abandonnés, lutte contre les parasites. Le coton (Gossypium hirsutum) est une fibre importante et un rendement financier partout dans le monde, ce qui montre une importance évidente dans la création de cultures. Les irritations et les croissances pathogènes présentent une préoccupation majeure pour la rentabilité et la nature du coton. À l'heure actuelle, le principal nuisible dans la production de coton est le ver de la capsule du coton (Helicoverpa armigera). Malgré le développement généralisé du coton transgénique BT résistant aux insectes démontrant d'énormes supériorités économiques et sociales 1, les changements de qualité du ver de la capsule au fil des âges et les déterminations résultant des protéines BT résistantes aux insectes offrent au ver de la capsule une protection contre les cultures BT transgéniques 2-6. Par conséquent, les cultures transgéniques anti-insectes rampantes avec des procédures alternatives sont attrayantes. L'ARNi, un puissant agent de suppression de l'expression de gènes chez les eucaryotes, a été découvert chez Caenorhabditis elegans 7 et a ensuite été développé comme un puissant système immunitaire chez de nombreuses espèces végétales 8, 9. L'ARN double brin (dsRNA) peut être développé par interprétation interne, transposon, transgénèse artificielle et infection à ARN, qui sont détectés et décomposés en petits ARN interférents (siRNA) par l'endoribonucléase Dicer. Le complexe de suppression activé par l'ARN (RISC), qui comprend l'ARNi et certaines protéines, telles que les endonucléases, les exonucléases et les hélicases, montre la capacité des nucléases à détecter et à séparer l'ARN cible spécifique 10. Ainsi, l'ARNi peut être utilisé à tort pour inhiber la transcription de l'expression de l'expression endogène. Partageant le système atomique de base d'arrangement de qualité explicite de silence dans un large assortiment de variétés animales, l'ARNi activé par l'ARNdb exogène a été créé comme l'un des appareils les plus productifs pour l'examen de la capacité de qualité 11 ainsi que du contrôle des bactéries 12-16.L'ARNdb délivré par les plantes transgéniques contre les espèces clés de vermine a été considéré comme un bouclier qui fournit aux plantes nuisibles transgéniques sûres un nouveau développement 17, 18. Le ver de la capsule du coton subit un processus de mue complexe au cours de son cycle de vie, dont le développement et le développement sont coordonnés par l'hydroxyecdysone 19-22 et l'hormone adolescente (JH) 22. Des analogues de JH ont été combinés de manière trompeuse et ont apporté de nouvelles originalités au travail innovant essentiel des pesticides 23. Des utilisations fructueuses d'analogues hormonaux identifiés avec le processus de mue ont indiqué que l'inhibition ou l'exagération des hormones critiques pourrait être un autre système pour la gestion coordonnée des insectes (IPM) des insectes appartenant au phylum Arthropoda 24. Dans cette optique, les qualités critiques ou les facteurs d'interprétation impliqués dans les voies de biosynthèse hormonale sont susceptibles d'être utilisés comme cibles idéales lorsque la technologie ARNi est appliquée à la lutte contre les insectes 25. JH est intégré au moyen de la voie du mévalonate chez les insectes, dans laquelle Le mévalonate est l'un des intermédiaires les plus importants. L'HMG-CoA, précurseur de la voie du mévalonate, doit subir trois réactions enzymatiques pour être transformé en mévalonate, et l'HMGR catalyse et contrôle la dernière réaction 26.