Abstrait

Développement d'une méthode analytique pour la détermination plasmatique de cinq antiépileptiques et de leurs métabolites par HPLC : comparaison avec les méthodes immunoanalytiques

Kaouthar Louati, Sarah Mahfoudhi et Fathi Safta

La bioanalyse étant devenue un outil essentiel dans le processus de découverte et de développement de médicaments, et il est souhaitable de disposer de méthodologies analytiques moins coûteuses, plus rapides et plus simples pour soutenir les études de dépistage des interactions médicamenteuses avec une validation statistique sur une large gamme de concentrations, l'objectif de ce travail est de développer une méthode chromatographique liquide haute performance simple, rapide et rentable pour la quantification simultanée de la concentration plasmatique humaine de six médicaments antiépileptiques fréquemment utilisés en pratique clinique (phénobarbital, lamotrigine, oxcarbazépine, mono-hydroxycarbazépine, carbamazépine et phénytoïne). Le clonazépam a été utilisé comme étalon interne. La préparation des échantillons consistait en une étape de déprotéinisation avec de l'acétonitrile. Après extraction, les analytes ont été séparés sur une colonne à phase inverse C18 thermostatée à 25°C. La phase mobile était composée de 50 % de tampon phosphate (pH = 7,5) et de 50 % de méthanol/acétonitrile (80:20, v/v), pompée de manière isocratique à 1 mL/min. Le détecteur UV était réglé à 215 nm. La durée totale d’exécution était de seulement 10 min. Les valeurs de rendement d'extraction étaient comprises entre 84 % et 99 %. Tous ces antiépileptiques sont séparés avec de bonnes formes de pic et un facteur de résolution supérieur à 2. La nouvelle méthode s'est avérée simple et rapide. Les courbes d'étalonnage étaient linéaires avec des coefficients de régression supérieurs à 0,998. La précision intra et interjournalière CV% variait entre 0,91 % et 5,69 %. La valeur de biais pour la précision variait de 2,42 % à 1,27 %. Les récupérations d'extraction absolues moyennes aux niveaux d'échantillons de contrôle de qualité faible, moyenne et élevée variaient de 84,17 % à 99,02 %. Cette méthode bioanalytique a été appliquée avec succès à des échantillons de plasma réels de 26 patients épileptiques. Nos résultats ont été comparés à ceux obtenus par des méthodes d'immuno-essais au laboratoire de biochimie-toxicologie de l'hôpital FATTOUMA et au Centre de Pharmacovigilance de Tunisie. La méthode développée semble être un outil approprié pour le suivi thérapeutique de routine des médicaments et également pour soutenir d'autres études cliniques basées sur la pharmacocinétique.