Abstrait

Purification et caractérisation de la β-1,3-glucanase de Candida Oleophila pour la lutte biologique contre Penicillium expansum

Carlos Tamayo-Urbina, Victor Guerrero-Prieto, Cesar Guigon-Lopez, Francisco Vargas-Albores, David Berlanga-Reyes, Carlos Acosta-Muniz5 et Damaris Ojeda-Barrios

Français Candida oleophila a été isolé à l'origine de la peau du fruit de la pomme dans la région de Cuauhtémoc, Chihuahua, Mexique, et utilise la production d'exo-β-1,3-glucanase comme mode d'action contre Penicillium expansum dans les pommes après récolte. L'activité β-1,3-glucanase générée par C. oleophila sur un milieu à teneur minimale en sel en utilisant du glucose, de la laminarine ou des fragments de paroi cellulaire de P. expansum comme seule source de carbone a été déterminée. L'activité β-1,3-glucanase la plus élevée (249 U/L) a été obtenue après 48 heures d'incubation en utilisant uniquement du glucose. La β-1,3-glucanase a été purifiée à partir d'un milieu de croissance en utilisant une chromatographie d'échange d'anions sur DEAE Sepharose, qui a augmenté l'activité spécifique de la β-1,3-glucanase de 74 fois, par rapport à l'extrait brut après ultrafiltration. La SDS-PAGE a démontré une β-1,3-glucanase purifiée avec un poids moléculaire estimé à 48,3 kDa. L'enzyme purifiée a hydrolysé la laminarine en glucose comme produit final et a été identifiée sur des gels de polyacrylamide natifs comme une protéine monomère. L'activité optimale s'est produite à pH 5 et à 40 °C, et l'enzyme était stable à 30 °C pendant 1 heure. L'exo-β-1,3-glucanase purifiée, lorsqu'elle a été mise à l'épreuve contre les conidies de P. expansum, a réduit la germination des conidies à 51,8 % et la croissance mycélienne à 31 %. Les résultats indiquent qu'un mode d'action de C. oleophila pour contrôler P. expansum consiste à produire de la β-1,3-glucanase et que la β-1,3-glucanase purifiée