Abstrait

Une nouvelle méthode de PCR en temps réel par transcriptase inverse pour la quantification de Vibrio Parahemolyticus viable dans les crevettes crues basée sur une méthode de construction rapide de courbe standard

Mengtong Jin, Haiquan Liu, Wenshuo Sun, Qin Li, Zhaohuan Zhang, Jibing Li, Yingjie Pan, Yong Zhao

Vibrio parahemolyticus est un pathogène important qui entraîne des maladies alimentaires associées aux fruits de mer. Par conséquent, des méthodes rapides et fiables pour détecter et quantifier le V. parahaemolyticus viable total dans les fruits de mer sont nécessaires. Dans cet essai, une PCR à transcriptase inverse en temps réel basée sur l'ARN (RT-qPCR) sans étape d'enrichissement a été développée pour la détection et la quantification du V. parahaemolyticus viable total dans les crevettes. Les étalons d'ARN avec les segments cibles ont été synthétisés in vitro avec l'ARN polymérase T7 puis convertis en ADNc pour établir la courbe étalon pour quantifier V. parahaemolyticus. L'efficacité de la réaction était de 94,56 %, et se situait dans la plage acceptable. Sans pré-enrichissement, la sensibilité de la RT-qPCR pour quantifier V. parahaemolyticus dans les crevettes était d'environ 58 ufc/g. De plus, la survie de V. parahaemolyticus dans des échantillons de crevettes enrichies a été quantifiée par RT-qPCR, qPCR basée sur l'ADN et méthode standard de comptage sur plaque. Les résultats de quantification de la RT-qPCR ont montré une bonne corrélation statistique (R2 = 0,96) par rapport à la méthode standard de comptage sur plaque. Cependant, le coefficient de corrélation entre la méthode de comptage sur plaque et la qPCR basée sur l'ADN n'était que de 0,85 pour quantifier V. parahaemolyticus. Sur la base des résultats, cette nouvelle méthode pourrait être un moyen efficace de fournir des données quantitatives fiables sur la viabilité de V. parahaemolyticus chez les crevettes.