Abstrait

Clonage et analyse de l'expression de Vv-lac3, un nouveau gène de laccase fonctionnel impliqué dans l'élongation du pied, basé sur la séquence génomique de Volvariella volvacea

Yuanping Lu, Guangmei Wu, Lingdan Lian, Lixian Guo, Zhiyun Yang, Wei Wang, Binzhi Chen, Baogui Xie

Les laccases fongiques jouent toujours un rôle important dans divers processus physiologiques et développementaux. Ici, nous avons cloné un gène de laccase et nommé Vv-lac3, ADNc de Volvariella volvacea, et exprimé l'ADNc dans Pichia pastoris. L'ADNc de Vv-lac3 était constitué de 1599 pb contenant un cadre de lecture ouvert (ORF) codant 532 acides aminés. L'analyse des acides aminés déduits a révélé que Vv-lac3 possédait un peptide signal de 19 acides aminés à l'extrémité N-terminale et une protéine mature de 513 acides aminés. Vv-lac3 contenait quatre sites de liaison au cuivre conservés, ce qui est la structure typique des laccases fongiques. L'analyse phylogénétique a montré que Vv-lac3 avait un degré élevé d'identité avec d'autres laccases basidiomycètes. L'analyse par électrophorèse sur gel de polyacrylamide (PAGE) et électrophorèse sur gel de polyacrylamide (SDS-PAGE) a démontré que le produit de l'ADNc de Vvlac3 de P. pastoris était une laccase fonctionnelle d'une masse moléculaire de 65 kDa. L'expression du gène Vv-lac3 chez V. volvacea a augmenté du stade bouton jusqu'au stade élongation ; elle a atteint un pic au stade élongation, puis a diminué au stade maturation, ce qui suggère que ce gène joue un rôle régulateur dans l'élongation du pied chez V. volvacea.